Katarzyna Skonieczna1, Jan Styczyński2, Anna Krenska2, Mariusz Wysocki2, Aneta Jakubowska1,
Tomasz Grzybowski1
Izolacja RNA z krwi zabezpieczonej na kartach FTA – zastosowanie w genetyce klinicznej i sądowej
RNA isolation from bloodstains collected on FTA cards – application in clinical and forensic genetics
1 Katedra Medycyny Sądowej, Collegium Medicum im. Ludwika Rydygiera w Bydgoszczy, Uniwersytet Mikołaja Kopernika w Toruniu,
Bydgoszcz, Polska
2 Katedra Pediatrii, Hematologii i Onkologii, Collegium Medicum im. Ludwika Rydygiera w Bydgoszczy, Uniwersytet Mikołaja
Kopernika w Toruniu, Bydgoszcz, Polska
1 Department of Forensic Medicine, Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Nicolaus Copernicus University in Torun, Bydgoszcz
2 Chair of Pediatrics, Hematology and Oncology, Ludwik Rydygier Collegium Medicum, Nicolaus Copernicus University in Torun,
Bydgoszcz
Streszczenie
Cel pracy: W ostatnich latach coraz częściej zwraca się uwagę na przydatność analiz RNA w badaniach z zakresu
genetyki klinicznej oraz sądowej. Znaczącym problemem podczas prac nad RNA jest jednak jego niska stabilność wynikająca
z aktywności RNAz. Tym samym unaocznia się potrzeba doskonalenia metod odpowiedniego zabezpieczania
materiału biologicznego do analiz RNA. Rozwiązania technologiczne w postaci kart FTA (Whatman) mogą być użyteczne
w kontekście zabezpieczania, transportu i przechowywania materiału biologicznego do badań RNA. Jednakże
na ilość i jakość RNA uzyskiwanego z kart FTA mogą mieć wpływ różne warunki jego izolacji. Celem niniejszej pracy
była analiza wydajności trzech metod izolacji RNA z krwi obwodowej zabezpieczonej na kartach FTA Classic Card
(Whatman) oraz ocena stabilności RNA w plamach krwi zabezpieczonych na takich kartach.
Materiał i metody: Badania przeprowadzono na plamach krwi zabezpieczonych na FTA Classic Card (Whatman)
od 59 osób. RNA wyizolowano z wykorzystaniem High Pure RNA Isolation Kit (Roche Diagnostics), Universal RNA/
miRNA Purification (EURx) oraz TRIzol Reagent (Life Technologies). RNA poddano ocenie ilościowej, a następnie
przeprowadzono odwrotną transkrypcję oraz PCR w czasie rzeczywistym.
Wyniki: Przeprowadzone badania wskazują, że karty FTA Classic Card (Whatman) stanowią użyteczne podłoże do
przechowywania w temperaturze pokojowej plam krwi do badań RNA. Ponadto wykazano, że metoda izolacji z wykorzystaniem
odczynnika TRIzol Reagent (Life Technologies) charakteryzuje się najwyższą skutecznością i wydajnością
w przypadku próbek przechowywanych do około 2 lat.
Wnioski: Przeprowadzone badania wykazały, że karty FTA mogą stanowić użyteczne podłoże do badań RNA w genetyce
klinicznej i sądowej.
Słowa kluczowe: plamy krwi, RNA, degradacja RNA, ekspresja genów, karty FTA.
Abstract
Aim of the study: In recent years, RNA analysis has been increasingly used in clinical and forensic genetics. Nevertheless,
a major limitation of RNA-based applications is very low RNA stability in biological material, due to the RNAse
activity. This highlights the need for improving the methods of RNA collection and storage. Technological approaches
such as FTA Classic Cards (Whatman) could provide a solution for the problem of RNA degradation. However, different methods of RNA isolation from FTA cards could have diverse effects on RNA quantity and quality. The purpose of
this research was to analyze the utility of three different methods of RNA isolation from peripheral blood collected on
FTA Classic Cards (Whatman). The study also aimed at assessing RNA stability in bloodstains deposited on FTA cards.
Material and methods: The study was performed on peripheral bloodstains collected from 59 individuals on FTA
Classic Cards (Whatman). RNA was isolated with High Pure RNA Isolation Kit (Roche Diagnostics), Universal RNA/
miRNA Purification (EURx) and TRIzol Reagent (Life Technologies). RNA was subjected to quantitative analysis followed
by reverse transcription and Real – Time PCR reaction.
Results: The study has shown that FTA Classic Cards (Whatman) are useful tools for storing bloodstains at room temperature
for RNA analysis. Moreover, the method of RNA extraction employing TRIzol Reagent (Life Technologies)
provides the highest efficiency and reproducibility for samples stored for no more than 2 years.
Conclusions: The FTA cards are suitable for collecting and storing bloodstains for RNA analysis in clinical and forensic
genetics.
Key words: bloodstains, RNA, RNA degradation, gene expression, FTA cards.
Pełna wersja w .pdf
Print
